T4 DNA聚合酶 (Exo-)說(shuō)明書

產(chǎn)品詳情

T4 DNA聚合酶是來(lái)源于T4噬菌體的DNA聚合酶，又名T4 gp43，分子量為104kDa，在T4噬菌體DNA復(fù)制中負(fù)責(zé)先導(dǎo)鏈和滯后鏈5’→3’方向的脫氧核糖核酸合成。T4 DNA polymerase的聚合酶活性強(qiáng)于DNA 聚合酶 I，不具有 5'-3' 核酸外切酶活性。本T4 DNA polymerase(exo-)為通過點(diǎn)突變D219A改造，使其3'-5' 外切核酸酶活性大大降低，但保留了完整的聚合酶活性。

本公司T4 DNA polymerase 是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

特點(diǎn)

? 無(wú)鏈置換活性

? 無(wú)5’-3’外切酶活性，不能進(jìn)行切口平移

? 3’-5’外切酶活性大大地降低

? 熱失活：75°C for 20 min

濃度

5U/μl

活性定義

一個(gè)活力單位即在37℃條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

活性測(cè)定條件

1×T4 DNA polymerase (exo-)Buffer：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl₂，0.5mM DTT，0.1mg/ml BSA (pH 7.9 @ 25°C)，37℃溫育

酶貯存緩沖液

     20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，10 mM MgCl₂，5mM DTT，50% Glycerol，pH 7.5。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

適用范圍

? 縫隙填充(無(wú)缺口平移活性)

? 去除3’突出單鏈或補(bǔ)平5’突出單鏈，形成平末端

? 生成無(wú)縫克隆中的5’突出端，實(shí)現(xiàn)基因和載體的互補(bǔ)配對(duì)

應(yīng)用舉例

1.補(bǔ)平5’突出單鏈，形成平末端

1）按下表配制反應(yīng)體系

2) 37℃×30min反應(yīng)，

3）75℃×15min失活酶，

按需進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量控制

經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

運(yùn)輸與保存

-20℃可保存2年，避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

l 適用于凹陷單鏈區(qū)聚合補(bǔ)平反應(yīng)（聚合酶反應(yīng)）的緩沖液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液。

l 鑒于AM Buffer B2是此酶最youBuffer，當(dāng)使用不包含BSA的緩沖液時(shí)，建議補(bǔ)充BSA。

l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。

l 離子強(qiáng)度超過100 mM時(shí)活性將被抑制，SH基的還原劑促進(jìn)活性。

l 活性易受模板DNA高級(jí)結(jié)構(gòu)影響，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以顯著提高聚合酶活性。